体外转录(IVT)RNA形式及RNP形式的锐湃尔®基因编辑技术展示对人源细胞的基因编辑能力,同时具备进一步工业化生产潜能。

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完全人源的基因编辑技术—锐湃尔®(REPERE®),已实现通过于体外转录产生RNA并于体外结合ORF1p和ORF2p形成RNP后转入人源细胞并对其进行基因编辑,将外源序列有效并准确的插入至人源细胞基因组中相应靶位点处。

例:一段外源性序列及靶位点的上下游序列连接经改造的Alu序列,该序列在体外经T7启动子转录产生RNA后,于体外结合ORF1p及ORF2p后导入Hela细胞,通过锐湃尔®(REPERE®)技术将其插入至Hela细胞的Lman1基因中的靶位点。qPCR结果显示:

Ct值GAPDH待插入序列插入ΔCtΔΔCt(实验组ΔCt平均值-对照1组ΔCt平均值)拷贝数相对量(2-ΔΔCt
对照1组板126.23N/A13.77
对照1组板226.14N/A13.86
对照1组板325.80N/A14.20
对照1组平均值  13.94±0.190.00±0.191.00(0.88-1.14)
实验6组板125.7226.450.73  
实验6组板226.0826.190.11  
实验6组板326.3326.590.26  
实验6组平均值  0.37±0.26-13.57±0.2612161.22(10155.69-14562.80)

Lman1基因为凝血因子V和VIII联合缺乏症(F5F8D)的致病基因,其突变可导致人FV和FVIII水平降低,患者可表现出自发性出血症状。

该结果显示了锐湃尔®(REPERE®)技术的基因编辑能力,同时体外转录(IVT)产生RNA及结合有ORF1p及ORF2p的RNP在提供更简便、高效和安全的给药方式的同时,亦为未来的工业化生产提供了可能。

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